تطبيق قارورة زراعة الخلايا في تجربة تحلل الخلية

يعد تحلل الخلية طريقة تجريبية مهمة لتغيير نفاذية الخلية ونشاطها. هذا يعني أنه بعد إصابة الخلية بفيروس ، يستخدم الفيروس العناصر الغذائية في الخلية المضيفة لتكوين نسله ، ثم يقوم نسل الفيروس بتدمير الخلية المضيفة ويتم إطلاقه خارج الخلايا. في تجارب تحلل الخلايا ، تعتبر قوارير ثقافة الخلية من المواد الاستهلاكية الشائعة. خطوات تحلل الخلايا هي كما يلي:

1. اسكب وسط الاستزراع ، وقم بإبزيم زجاجة استنبات الخلية رأسًا على عقب على ورق ماص بحيث يمتص الورق الماص وسط المزرعة (أو ضع الزجاجة في وضع مستقيم لفترة من الوقت للسماح لوسط المزرعة المتبقي بالتدفق إلى قاع الزجاجة ثم استخدم ماصة لامتصاصه بعيدًا). ​​

2. أضف 3 مل من 4 ℃ مبردة مسبقًا PBS (0.01M pH7.2 ～ 7.3) لكل زجاجة من الخلايا. ضع الخلايا بشكل مسطح ورجها برفق لمدة دقيقة واحدة لغسل الخلايا ، ثم تخلص من محلول الغسيل. كرر العملية المذكورة أعلاه مرتين ، اغسل الخلايا ثلاث مرات لغسل سائل المزرعة. تخلص من برنامج تلفزيوني وضع قارورة الثقافة على الجليد.

3. أضف 10ul PMSF (100mM) إلى محلول تحلل 1 مل ، ورجه جيدًا وضعه على الثلج. (يجب رج PMSF حتى لا توجد بلورات قبل الاختلاط بمحلول التحلل.)

4. أضف 400ul من محلول تحلل يحتوي على PMSF لكل قارورة من الخلايا ، ثم ضعها على الجليد لمدة 30 دقيقة. من أجل تصفية الخلايا بالكامل ، يجب رج القارورة بشكل متكرر.

5. بعد التحلل ، استخدم مكشطة نظيفة لكشط الخلايا على جانب واحد من قارورة الثقافة (يجب أن يكون الإجراء سريعًا) ، ثم استخدم مسدسًا لتحريك حطام الخلية والمحلول إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل. (يجب أن تتم العملية بأكملها على الجليد قدر الإمكان.)

6. أجهزة الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. (قم بتشغيل جهاز الطرد المركزي مسبقًا للتبريد المسبق)

7. نقل المادة الطافية بالطرد المركزي إلى أنبوب الطرد المركزي لمدة 0.5 دقيقة وتخزينها في -20 درجة مئوية.

قوارير زراعة الخلايا لا تستخدم فقط لتجارب تحلل الخلايا ، ولكن أيضًا للخلية متوسطة الحجم وزراعة الأنسجة في المختبر ، مثل خلايا فيرو ، HEK 293 خلية ، خلايا CAR-T ، خلايا CHO ، خلايا حشرية ، إلخ.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.